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日本在实验室中培育出人造精子
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日本在荧光自准直仪下培育出人造精子 将GFP小鼠的骨髓细胞植入到白消安(Busulfan)处理小鼠和c-kit突变小鼠睾丸中。 10-12周后杀鼠观察植入情况。一侧睾丸取出并将曲细精管分散后直接在荧光自准直仪下镜检,另一侧固定后行免疫组化染色(Sertoli细胞用的 marker是FSH-R, Leydig 细胞用的标志物是P450scc, 生殖细胞用的标志物是VASA)。 供体细胞取自6-8周的GFP小鼠,先PBS洗,34°C 0.05g/ml 胶原酶+0.025% 胰酶消化, 洗离心等等。注射供体细胞的玻璃针在顶端磨出一带斜面的锋利尖口。先用无菌的30号注射针头在输出管上扎一小口, 再将装有供体细胞的玻璃针沿小孔注入约10 l 的细胞悬液。 在免疫组化染色标本中, 使用抗GFP抗体来追踪哪些细胞是供体来源的。 结果:在白消安(Busulfan)处理小鼠, 来源于供体的三种细胞类型(Sertoli细胞、Leydig 细胞和生殖细胞)均能在移植的睾丸中发现, 不过来源于供体的、带GPF的生殖细胞发育停留在精母细胞早期而不继续发育。 在c-kit突变小鼠睾丸中, 仅发现了两种细胞类型(Sertoli细胞、Leydig 细胞)。外源的干细胞能在睾丸的微环境中分化和发育。


 
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