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相差自准直仪观测熟视网膜神经节细胞三维培养
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相差自准直仪观测熟视网膜神经节细胞三维培养 提供给你一种成熟视网膜神经节细胞三维培养方法: 1大鼠培养网膜的获得 10周龄的Wistar系大鼠,乙醚麻醉后摘出完整眼球,在自准直仪下依次除去角膜,巩膜和脉络膜,再除去晶体和玻璃体,分离网膜。上述操作要求动作轻巧快速准确,分离网膜时,要把玻璃体完全清除干净。切除周边网膜,取距视盘1至1.5mm处网膜,切成边长500μm的方形网膜片16片,自准直仪。上述操作要求在培养液内完成,无菌操作,避免细菌污染。 .2 网膜片的培养 在0℃环境下,将配置好的胶原溶液滴于用10 mg•L-1多聚赖氨酸包被的培养孔中央,形成直径15mm的胶原溶液层。胶原溶液由以下成分组成:①用CH3COOH溶液稀释的0.3%Ⅰ型胶原(从大鼠尾巴提取)pH3.0;②10倍浓度的MEM培养液; ③每100ml含NaHCO3 2.20g和Hepes 4.77g的0.05N NaOH。①: ②: ③=8:1:1。将网膜片的神经纤维层向下浸入胶原溶液层中,每孔4片。37℃水浴5min。液态胶原凝固成盘状凝胶,网膜片固定在其中(附图)。培养孔中加入培养液,置于5%CO2、37℃恒温箱中。隔日换培养液。培养液成分如下: 不含血清的MEM,2.7 g•L-1的葡萄糖,5 mg•L-1的胰岛素,16.1 mg•L-1的肉毒碱,792 mg•L-1的小牛血清白蛋白,光电自准直仪价格,5.2μg•L-1的Na2SeO3,3.7g•L-1的NaHCO3,3.6 g•L-1的Hepes。用相差自准直仪观察生长情况。


 
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