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解剖自准直仪下印迹试验结果光密度法定量分析法
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解剖自准直仪下印迹试验结果光密度法定量分析法 Western印迹试验:40只小鼠(每次n=10),用异氟烷深度麻醉,迅速除去头部。用10ml注射器吸出脊髓。在解剖自准直仪下,用精细钳沿正中沟将 4/5腰椎左右侧分离。以组织蛋白提取液分别注入每侧脊髓液,以声裂法混匀,自准直仪价格,在48C下13000rpm离心5分钟。Bio-Rad蛋白分析系统测定上清液。加入标准缓冲溶液(2%十二烷基硫酸钠(SDS),10%丙三醇,体视自准直仪,0.1%嗅酚蓝,2% 2-巯基乙醇,50 mmol/L Tris-盐酸 pH=7.2)稀释样本。将脊髓突触素进行10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)120V 90分钟。之后将蛋白质转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Immobilon-P转移膜,0.45mM孔径),48C,90V进行60分钟。该膜用5% 脱脂奶粉封闭于带缓冲盐溶液的Tween-20中(TTBS,0.1% Tween-20, 20mM Tris-盐酸 137mM NaCl, pH 7.4),在48C下保存过夜。在室温下,将PVDF膜与兔的脊髓素特异性多克隆抗体(1:2000),和鼠的a-微管蛋白特异性单克隆抗体 (1:500)培养三小时。用TTBS清洗印迹并和辣根过氧化物酶结合二次抗体(1:3000)室温培养一小时。每份样本都进行彩色分子量标准参照。 Western印迹试验结果用光密度法定量分析。 相差自准直仪观测熟视网膜神经节细胞三维培养


 
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