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荧光自准直仪实验总结-----新闻标题
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荧光自准直仪实验总结

用哪种固定方法 一般认为有两种:冷acetone和4%PFA
我两种都用过,感觉用4%PFA做前固定过夜后糖脱水效果是最好的,但是有点费时费力,经过比较,用冷acetone做后固定 5分钟4摄氏度的效果也说得过去,也很方便省时。比较推荐!

blocking solution的配制和时间 我用的是5%serum 1%BSA 0.05%Tween PBS 室温染色盒内1个小时,如果不放心可以两个小时,但是一旦blocking了就要注意不能让切片干燥,所以个人认为一个小时应该够用了。(serum注意是和二抗同一种属)

blocking solution的使用量 我用的是每一张100μl

切忌保持湿度 染色开始后切忌不能让片子干燥了,一旦干燥了就会很糟糕,我也在这个地方吃了很多亏。。。
一抗的名称 使用浓度 染色时间 保持湿度 遮光否
二抗的名称 使用浓度 染色时间 保持湿度 遮光否

洗净方法 一抗之后我一般洗三次 5分钟换一次PBS 4摄氏度
二抗之后我一般洗四次 5分钟换一次PBS 4摄氏度

#封片剂干燥时间 最好是30分钟以上,干燥后马上观察效果公认是最好的

#荧光自准直仪的使用 建议一定要跟着老师,前辈,多观摩几次之后再自己动手

简单罗列了几个个人认为需要提前做好提纲的关键词
刚开始做的时候有挺多困难的
慢慢摸索也许会比较辛苦
但是一旦量变到质变之后再加上反复回头看反复总结经验,就会有提高

最后附上一张刚做的感觉还算清楚的大肠炎模型的切片中
colonic patch的部位, DC和Tcell 聚集的地方应该是在antigen presenting
蓝色 上皮细胞
绿色 DC
红色 T cell

 

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