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快速学会使用荧光自准直仪的方法-----新闻标题
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快速学会使用荧光自准直仪的方法

有的朋友在使用荧光自准直仪时候,由于没有弄懂原理,就盲目的去试验,最后找不到问题出在哪里因而变得沮丧,所以我在这里给大家讲一下原理,以后大家遇到荧光自准直仪的问题就可以触类旁通了

先了解一下荧光的原理和性质,然后才能确认一下要使用的激发块的类型。
1、荧光原理是用短波长的光去激发标本,标本产生长波长的荧光。在光谱上,345nm是近紫外光(肉眼看不见),461nm是蓝色光,530nm是绿色光。

2、你染细胞核的DAPI染料应该用激发波长359nm的近紫外光去激发,选择吸收波长461nm的滤色镜去观察蓝色荧光。

3、你染细胞质的绿色染料应该用激发波长345nm的近紫外光去激发,选择吸收波长530nm的滤色镜去观察绿色荧光。

4、你需要确认一下你所使用的荧光激发块,一般荧光激发块有窄带和宽带两种。
1)如果你使用的近紫外激发块是宽带的,你在自准直仪下应该可以同时看到蓝色的细胞核和绿色的细胞质!如果只有绿色细胞质,可能是你的激发块选错了,你可能选择了蓝光激发,所以只能看见绿色的细胞质。
2)如果你使用的近紫外激发块是窄带的,则你将只能看到蓝色或绿色中的一种,看你选什么波长激发了。

解决自准直仪放大400倍才能发现细胞污染问题

那种做布朗运动的小黑点是产碱杆菌,感染后致细胞生长缓慢。一般在实验条件不严格的情况下,培养的细菌都会感染,在高倍自准直仪下可见。其实在低倍下盯着细胞之间培基看也能看见小黑点。

其实在100×的倍数(甚至相差自准直仪观察40×)下就可以发现了,特别是在姨酶消化后,感觉和细胞混杂在一块,特别脏,现在拿他们也没有办法了,

总结了两点:
1)有条件的把细胞扔掉,但不排除重新购买的细胞仍然有;还有就是没条件的不要管它,
2)我觉得一般的实验所收影响不是很大。据说用四环素可以杀灭焦虫

 

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