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讲诉共轭焦自准直仪操作步骤和方法------新闻标题
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实验流程:
*.开冷气,开风扇,开冷却器。

1.将汞灯打开,将自准直仪总灯源打开。
2.打开scanner,打开电脑电源。
3.开启Ar雷射风扇,开启雷射,He-Ne雷射旋钮右扳至start即可,Ar雷射开启方式,要将旋钮转到3点锺方向,再转回start,而亮灯开启表示开启成功。再调整Ar雷射强度,转至12点锺,不要调整到max,会使萤光很容易被分解。

4.启动软体。
5.将样品放好,滴上油,调整镜头,63/1.32/oil。
6.观察样品应注意事项:A.将光路控制杆推入VIS位置。B.将萤光滤镜调控至1or2or3的位置。(1:UV灯,2.FITC萤光滤镜,3.rhodamine萤光滤镜)。C.将tube lens转到1.0X的位置。D.打开UV灯,推下杆钮(0的位置)。

7.先以快速上升钮,调控上升载物台,再将接近物镜时,就小心缓慢的调整上升钮,会发现绿光会渐渐变暗,等绿光突然变亮,表示镜头已经接触到油滴,此时改转动细调节轮。快速地朝自己的反向转动,转动后视野红色会变亮在变暗,此时表快接近目标,在继续转动看到目标为止。(寻找时利用FITC绿色灯激发,于目镜中看到红色的光。利用FITC寻找最快)。看到后调整视野,至最佳的状况。

8.将自准直仪视野转至电脑,须注意事项:A: 将光路控制杆拉出。B.将萤光滤镜调控至4的位置。(4:电脑)。C.将tube lens转到UV scan的位置。D.关上UV灯,推上杆钮(1的位置)。

9.操作软体:
10.选用萤光感测光谱测定,在acquire中,按Beams,光线激发光(U-FITC-TRITC-1)选取好,按两下。大多使用user定的,不要去改leica内定的质,如果要自行设定条件及一各专属的应用档名,则按save,输入档名即可。选取设定的PMT,选取Glow(O):讯号感测超过阀值,会警示与变蓝色,其馀为灰阶设定。

11.设定和确定基本扫描参数[obj]>物镜的倍数:PL-APO 63x/1.32/oil,[mode]>扫描模式:xyz,[format]>选512*512,[speed]>扫描速度:400Hz,[pinh]>选Airy1,[zoom]选取1,[8/12]选取8 bits。

12.完成上列基本设定后,即可开始执行连续扫描continuous scan,扫描后快速调整PMT感测的gain,以出现一点点蓝色为佳,也可以调整Z轴,调整焦距,让影像更清晰,完按stop。

*.除了PMT及Z-focus调整外,也可以调整雷射强度,光谱感测范围,或pinhole大小,或改变PMT的offset,调整后,可再按一次continuous scan,及可以储存影像。如果影像不够清晰或杂讯太多,则可以在使用average的撷取处理。

13.影像储存:将游标至于影像中,按右键,选sent to>experiment> >影像储存。再至暂存区,选取档案,至file指令中,选取save as。

14.影像average处理:调大 和 的值,2*2或4*4,值越大,越清晰。在按 ,扫完按stop,扫完在影像中按滑鼠右键,储存。

15.在影像调控显示视窗中,可以选取显示视窗,如果为ch-3,视窗为(FITC/TRITC/Cy5),第四个ch显示区为3各视区的overlay。视窗颜色可以选取旁边的调色带,来更改颜色。

16.连续扫描:调整 *1, *1,按 ,调整Z轴,按 ,调整Z轴,按 。按 看厚度,按 选取切片次数(1.2μm/次)。关掉 ,调整 *2, *2,按 。扫完影像后,可以以play连续观看,或 观看所有影像,或以 选取最好的影像,也可以用旁边的调色带调整影像,完成后,在影像中按滑鼠右键,储存。储存完后选取再按file储存。)

17.关机:调整Ar雷射左调至min最小处。关闭He-Ne雷射,关闭Ar雷射至off。关闭扫描器电源,结束软体,关闭电脑电源,Ar雷射电扇不要关,关掉自准直仪灯源(汞灯,卤素灯),关闭自准直仪总电源开关,擦镜头,将镜头转至空镜头,关闭实验室总电源。
 

 
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